Как определить концентрацию гемоглобина методом сали

Лабораторная работа № 3.10. Определение количества гемоглобина

. Содержание гемоглобина в норме приведено в таблице 16.

Таблица 16 –Содержание гемоглобина в норме

Показатели Пол Система Среднее значение
г% г/л Ед. г% г/л
Гемоглобин (Hb) М 13,0 –16,0 130,0 -160,0 80-108 15,8
Ж 12,0 –15,0 120,0 -150,0 70-95 13,7

А). Гематиновый метод (метод Сали).

Цель работы: освоить калориметрический способ определения гемоглобина с помощью гемометра Сали.

Основан на превращении гемоглобина при добавлении к крови хлористоводородной кислоты в хлорид гематина коричневого цвета. В учебных целях используют гемометр Сали, состоящий из трех пробирок одинакового диаметра (рис.18). Одна (средняя) пробирка – пустая и сверху открыта, две другие запаянные и содержат стандартный раствор солянокислого гематина определенной окраски.

Оборудование:гемометр Сали, 0,1 % раствор НСl, смеситель, стерильный скарификатор, пипетка, дистиллированная вода, стеклянная палочка, спирт, вата.

Рис. 18 Гемометр Сали

1 – пробирки со стандартным раствором;

2 – градуированная пробирка с исследуемой кровью;

5 – палочка для смешивания.

ХОД РАБОТЫ

1.В градуированную пробирку гемометра Сали налить 0,1 % раствор соляной кислоты до нижней круговой метки – 0,2 мл.

2.Приготовить смеситель к забору крови (на тупой конец надеть резину, промыть водой и продуть).

3.Ватным тампоном протереть мякоть 4-го пальца левой руки и скарификатором проколоть палец

4.Первую каплю крови стереть сухим тампоном. Во вторую каплю погрузить кончик смесителя, держа его вертикально. Набрать крови до метки 0,2 мл.

5.Смеситель погрузить в градуированную пробирку гемометра и выдуть из нее кровь на дно пробирки.

6.Смеситель промыть 2-3 раза 0,1% раствором соляной кислоты из верхнего прозрачного слоя.

7.Содержимое пробирки тщательно перемешать, ударяя пальцем по ее концу и помешивать палочкой, а потом оставить на 5 минут.

8.В пробирку с раствором, размешивая палочкой, по каплям внести дистиллированную воду до полного совпадения цвета жидкости в градуированной пробирке с цветом стандарта.

9.Показания гемометра снять по нижнему мениску жидкости в градуированной пробирке.

Градуированная пробирка гемометра имеет две шкалы, нанесенные с обеих сторон. Одна шкала (с делениями от 2 до 23) показывает количество гемоглобина в граммах на 100 мл крови, грамм-процент (г%) гемоглобина. Вторая шкала (с делениями от 12 до 140) показывает единицы гемометра (или относительный процент гемоглобина), при этом 100 единиц (или 100% по гемометру Сали) означают, что в 100 мл крови содержится 16,67 г гемоглобина, или 100 единиц соответствует 16,67 г%.

10. Вычисление концентрации гемоглобина по формулам в г%, % и г/л

Пример 1. Равенство красок достигнуто на отметке 15 г% гемоглобина. Для расчета концентрации Hb в относительных процентах применяется формула:

Формула для расчета: Х = (100 % х 15 г%)/16,7 г%,

где Х – относительное содержание гемоглобина, %.

16,7 – стандартная концентрация Hb в г%.

Пример 2. Равенство красок достигнуто на отметке 80. Следовательно, исследуемая кровь содержит 80 % гемоглобина по сравнению со стандартом (16,7 г%)

Формула для расчета: Х = (16,7 г% х 80 %)/100 %,

где Х – количество гемоглобина в г%

Для того чтобы выразить концентрацию гемоглобина в граммах на литр (г/л), нужно количество гемоглобина в г% умножить на 10.

Пример 3. Гемоглобин – 13,5г% = 13,5 х 10 = 135 г/л.

Грамм процентное обозначение гемоглобина имеет преимущества перед обозначением просто в единицах, так как оно дает реальную количественную величину концентрации гемоглобина.

Оформление протокола

1. Определите концентрацию гемоглобина.

2. Занесите данные в таблицу 17

Таблица 17. –Собственные результаты исследований

Пол Содержание гемоглобина в крови
Полученные результаты Норма
В грамм процентах (г%)
Мужчины 13,0 –16,0
Женщины 12,0 –15,0
В грамм на литр г/л
Мужчины 130,0 -160,0
Женщины 120,0 -150,0
В относительных процентах
Мужчины
Женщины
  1. Сделайте заключение о соответствии полученных вами данных нормативным.

Б).Гемоглобинцианидный метод(сиспользованием фотометрического гемоглобинометра АГФ – 03/540 – «Минигем».

Оборудование:гемоглобинометр АГФ – 03/540 – «Минигем», трансформирующий раствор,стерильный скарификатор, гемоглобиновый капилляр (0.02 мл), пипетка с грушей (5мл), дистиллированная вода, стеклянная палочка, спирт, вата.

Читайте также:  Критерии блокады левой ножки пучка гиса

1.Проверить оптический ноль прибора (в соответствии с техническим паспортом прибора).

2.Подготовить пробирки с трансформирующим раствором в объеме -5 мл.

3. Произвести забор капиллярной крови в гемоглобиновый капилляр и перенести в пробирки с трансформирующим раствором.

4. Тщательно перемешать стеклянной палочкой.

5.Через 20 мин. провести замер пробы, для чего перелить в оптическую кювету реакционную смесь из очередной пробирки и установить кювету в фотометрическую ячейку прибора.

6.Появление звукового сигнала свидетельствует о фотометрировании и на индикаторе появляется число, соответствующее концентрации гемоглобина (в гр./л).

7. Вылить содержимое кюветы, удалить оставшиеся капли с верхнего края кюветы при помощи бинта и перейти к очередному замеру.

Контрольные вопросы для самостоятельного изучения:

1.Строение молекулы гемоглобина

2.Строение молекулы миоглобина.

3.Соединения гемоглобина с различными газами и их значение.

6.Как определить содержание гемоглобина в крови.

7.Типы гемоглобина у эмбриона, плода, новорожденного и детей раннего возраста.

Поперечные профили набережных и береговой полосы: На городских территориях берегоукрепление проектируют с учетом технических и экономических требований, но особое значение придают эстетическим.

Общие условия выбора системы дренажа: Система дренажа выбирается в зависимости от характера защищаемого.

Механическое удерживание земляных масс: Механическое удерживание земляных масс на склоне обеспечивают контрфорсными сооружениями различных конструкций.

Источник: cyberpedia.su

Как определить концентрацию гемоглобина методом сали

Стандартный анализ крови обязательно включает в себя показатель уровня гемоглобина. Такой анализ называется клиническим и является базой для исследования практически всех заболеваний. Белок гемоглобин находится в клетках крови – эритроцитах. Он выполняет важную функцию клеточного дыхания. Благодаря железу, которое в нём содержится, кровь имеет красный цвет. Колориметрический принцип определения уровня гемоглобина основан именно на таком свойстве пигментации. Как делать такой анализ предложил швейцарский врач Герман Сали (Herman Sahli) в конце 19 века.

Принцип проведения

Определение количества гемоглобина по методу Сали является классическим, его до сих пор используют во многих лабораториях. Гемоглобин – это сложный белок из группы гемопротеинов. Он состоит из двух компонентов: белкового глобина и небелкового гема. Одна молекула гемоглобина содержит 4 гема. В центре каждого из них находится атом железа, который умеет обратимо соединяться с атомами кислорода и углекислого газа, при этом не окисляясь. Именно наличие этого элемента в крови придаёт ей характерный цвет.

Читайте также

На основе такого свойства гемоглобина Г. Сали изобрёл метод измерения его количества, который основан на определении цветового показателя крови. В кислой среде глобин легко отделяется от гема, который начинает взаимодействовать с кислородом. Такая химическая реакция также меняет валентность железа и позволяет образовать новое вещество – гематин. Его и используют для колориметрического анализа количества гемоглобина в крови по методу Сали.

Что представляет собой гемометр Сали

Для подсчёта уровня гемоглобина используют прибор, который изобрёл швейцарский диагност. Гемометр Сали состоит из трёх пробирок одинакового размера. Две пробирки запаяны и наполнены раствором крови в соляной (хлороводородной) кислоте. Такая смесь носит название гематин и имеет коричневый оттенок. Интенсивность цвета зависит от количества гемоглобина. В запаянных пробирках гемометра цвет соответствует стандарту содержания гемоглобина в крови здорового человека.

Норма гемоглобина в крови мужчин составляет 130-160 г/л, у женщин – 120-140 г/л.

Третья пробирка имеет шкалу, на которой отмечены грамм-проценты и единицы гемометра. Эта ёмкость заполняется анализируемым материалом. Колориметрический анализ производится лаборантом визуально. Анализируемый гематин разбавляют водой до определённого цвета, который сравнивают со стандартным образцом.

Методика проведения

Для проведения лабораторного исследования крови по методу Сали осуществляют следующие действия. Пустую пробирку гемометра заполняют соляной кислотой до нижней отметки. Концентрация раствора должна составлять 0,1 Н. Далее специальным капилляром, который входит в комплект гемометра, набирают 0,02 мл крови пациента.

Капилляр опускают в кислотный раствор и аккуратно выпускают в него, забранный у пациента, материал. Кровь должна оказаться под слоем кислоты так, чтобы сама кислота осталась прозрачной. Далее содержимое пробирки перемешивают и выдерживают в нетронутом состоянии 5-15 минут. За это время произойдёт взаимодействие жидкостей, и образуется гематин коричневого цвета.

Читайте также:  Ангиопластика и стентирование коронарных артерий

В образовавшееся вещество по капле добавляют дистиллированную воду, пока цвет не станет идентичным с цветом образца в запаянной пробирке гемометра. Каждый раз гематин размешивают стеклянной палочкой. При этом жидкость поднимается, её уровень соответствует шкале контрольной пробирки. Как только цвет анализируемого материала сравняется со стандартным цветом, лаборант отмечает, какому делению шкалы грамм-процентов соответствует поднявшаяся жидкость. Для перевода в необходимые граммы на литр полученную цифру умножают на 10.

Насколько точный метод определения гемоглобина

Швейцарский диагност изобрёл свой способ определения гемоглобина в крови в конце 19 века. На тот момент этот способ был самым точным. Но новые исследования, открытия в области медицины и молекулярной диагностики создали новые методы. Появились аппаратные методики, которые исключают человеческий фактор при исследованиях. Они способны оценивать биологический материал при помощи более точных замеров.

В связи с этим у метода Сали есть ряд недостатков, которые снижают точность измерения:

  1. Анализ цветного показателя гематина лаборант проводит визуально. Поэтому на точность влияет освещение в помещении, способность конкретного человека различать нюансы цветового спектра, особенности зрения лаборанта. Но даже здоровый человеческий глаз не может улавливать минимальные отклонения цвета, в отличие от высокоточной аппаратуры.
  2. Образцы в гемометре Сали со временем выцветают. Изменённый цвет стандарта даёт большую погрешность конечного результата.
  3. Превращение крови в гематин имеет разное время реакции. Определить конечный этап реакции невозможно, он колеблется от 2 до 40 минут и зависит от содержания в крови белков. Также оттенок может меняться и из-за разного количества билирубина.


Источник: sosud-ok.ru

Особенности определения гемоглобина в крови, основные методы диагностики и лечения патологических состояний

Общеклинический анализ крови – это первоочередное исследование, назначаемое больным при поступлении в муниципальные или частные клиники. Любые патологические изменения со стороны различных органов отражаются на составе крови.

Общеклинический анализ исследует количественные и качественные свойства красных форменных элементов и содержание в них белка гемоглобина. Квантитативное (количественное) определение гемоглобина в крови – важная составляющая работы лабораторных сотрудников, направленная на своевременное выявление анемии.

Красные форменные клетки вырабатываются (с помощью животных белков, железа и витаминов) в красном костном мозге и разрушаются под действием ферментов селезенки. Они выполняют жизненно важные функции – транспорт кислорода к тканям и утилизацию оксидов углерода. Повышенный или пониженный гемоглобин указывает на патологии органов различной этиологии. В предложенном ниже видео показан процесс переноса оксидов.

Строение и физиология гемоглобина

Гемоглобин – это четвертичная глобула, которая занимается утилизацией и поставкой оксидов в организме человека. Данное пептидное соединение является тетрамером, состоящим из четырех субъединиц. Одна полипептидная структура способна переносить через кровоток до четырех молекул кислорода.

Гемоглобин состоит из простетической группы и глобулина. Простетическую группу железосодержащего пептида принято называть «гемом». Благодаря гему кровь приобретает свойственный ей окрас – алый или синевато-красный. Простетическая группа содержит железо, которое участвует в восстановительно-окислительных процессах.

Различают несколько основных видов гемоглобина:

  • Оксигемоглобин,
  • Карбоксигемоглобин,
  • Дезоксигемоглобин,

Оксигемоглобин образуется при присоединении кислорода к гемоглобину в условиях высокого парциального давления. При отщеплении кислорода от железосодержащего белка образуется устойчивая форма – дезоксигемоглобин. Карбоксигемоглобин появляется в результате присоединения монооксида или диоксида углерода. Стоит отметить, что монооксид углерода в 250 раз эффективнее связывается с железосодержащим белком, чем обуславливается его опасность для жизни при вдыхании (угарный газ).

Дезоксигемоглобин сильно токсичен для тканей человеческого организма, поэтому существуют специальные системы «ликвидации» гемоглобина в крови. Этим занимается особое пептидное соединение – гаптоглобин.

Определение количества гемоглобина по методу Сали

Метод базируется на свойстве железосодержащего белка превращаться в хлорид гематита под действием соляной кислоты. Методика Сали считается неинвазивным вмешательством.

Интенсивность цвета жидкости прямо пропорциональна концентрации гемоглобина в крови. Раствор хлоргемина при проведении исследования разводят дистиллированной водой до стандартного цветового спектра.

Важно! Стоит отметить, что гемоглобин по Сали не получил широкого распространения на территории РФ.

Читайте также:  Плазмаферез польза и вред

Метод, который применяется для определения уровня гемоглобина, принято называть «гемометром Сали». Другое название современного метода определения гемоглобина по Сали – гемоглобинометрия. Такой колориметрический аппарат состоит из специального штатива, который имеет три гнезда.

Боковые гнезда держат две склянки с веществами. Среднее гнездо данного прибора необходимо для размещения пронумерованной мензурки из стекла. Градуированная мензурка обладает шкалой с делениями, которые измеряют количество железосодержащего пептидного соединения в граммах на децилитр (г/дл). При клиническом исследовании крови используется специальная пипетка для воды и размешивания содержимого склянки.

При проведении полного анализа по методу Сали вначале в склянку наливается 0.10% раствор соляной кислоты. Потом выполняется забор исследовательского материала из кончика пальца в пипетку до отметки «0.04 мл». Впоследствии пипетку обтирают стерилизованной ваткой и размещают в мензурку с раствором HCl.

Медицинский сотрудник несколько раз встряхнет содержимое пробирки и поставит отстаиваться. Полное химическое превращение железосодержащего пептидного соединения в растворе соляной кислоты происходит не менее чем за 10-15 минут.

По истечении пяти минут оценивается цвет жидкости в гемометре со стандартными цветами. Как правило, он более темный, нежели в стандартных пробирках. Используя обычную пипетку к раствору постепенно добавляют чистую воду, попеременно перемешивая содержимое и сравнивая со стандартным цветом. На окончательном этапе цвет материала должен сравняться с нормативом. После всего вышеперечисленного замеряют уровень жидкости и проводят соответствующие подсчеты.

В промышленном масштабе выпускаются гемометры, которые содержат исключительно грамм-процентную градуированную шкалу. Нормой гемоглобина у мужчин и женщин принято считать значения 15 г%, или 168 г/дл. Но даже при соблюдении определенных правил наблюдаются небольшие погрешности в измерениях. В некоторых случаях разные результаты могут в значительной мере исказить данные о болезни.

Цианметгемоглобиновый метод определения содержания гемоглобина в крови

Стандартизированным и наиболее точным методом определения гемоглобина принято считать гемоглобинцианидный анализ. Такая методика базируется на свойстве железосодержащего пептидного соединения превращаться в цианметгемоглобин при добавлении к биологическому материалу определенного вещества.

Содержание цианметгемоглобина замеряют фотометрически. При анализе крови в роли реактива применяется раствор Драбкина. Железосодержащий белок под влиянием синеродисто-железистого калия превращается в метгемоглобин, который потом преобразуется в присутствии цианина калия в гемиглобинцианид.

Типичное соотношение разведения биологического материала с реагентом — 2 : 500 (0,04 миллилитров капель крови и 10 мл реактива). По истечении 30 минут, которые нужны для полного преобразования железосодержащего пептида в гемиглобинцианид, измеряют «гашение» при длине волны в 550 нанометров и плюс толщине слоя в 2 см против воды на спектрофотометре СФ или на ФЭК и ему похожей технике. С помощью СФ также измеряют уровень свободного железосодержащего пептида в плазме.

На данный момент разработаны гемиглобинцианидные цветовые стандарты в ампулах, которые точно соответствуют определенному уровню железосодержащего белка. Растворы, полученные в результате определенных реакций, исследуют с помощью колориметрии. После всего рисуют рабочие таблицы и узнают, какое количество железосодержащего пептидного соединения содержится в кровотоке.

Есть устройства, специально созданные для определения количества гемоглобина. Зачастую используются именно циангемоглобиновые методы определения гемоглобина. Как правило, гемоглобинометрические приборы могут работать самостоятельно. Широкое применение такие тест-устройства для определения гемоглобина в крови получили в домашних условиях. Однако в ряде ситуаций больные не учитывают влияние внешних факторов в доме (стресса, еды).

Другой набор методов диагностики уровня гемоглобина в крови

Значительную известность и распространение среди различных лабораторий получила методика гемихром (или гемихромный метод). Принцип данного метода основан на преобразовании всех форм железосодержащего пептида в гемихром, который имеет красноватый цвет. Преимущество гемихромного метода заключается в том, что он не является токсичным.

Иногда назначают прохождение биохимического исследования на гликированный гемоглобин. Стоит отметить, что важное значение гликозилированный гемоглобин и глюкометр имеют при диагностике сахарного диабета.

При определенных состояниях в моче может содержаться гемоглобин, поэтому нередко данная биологическая жидкость и ее анализы являются важными частями диагностики различных заболеваний. Такое случается при переливании несовместимой крови от донора, в особенности у ребенка.

Источник: dlja-pohudenija.ru